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| FRET Anwendungen jetzt im Modul Physiologie |
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Mit dem FRET Verfahren analysieren Sie Wechselwirkungen zwischen Proteinen und Nukleinsäuren. Bisher verwendeten Sie in AxioVision dafür die FRET Applikation. Diese haben wir jetzt vollständig in das Physiologie Modul eingebunden.
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| AxioVision FRET Farbkodierung, Methode nach Youvan et al (1997). |
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| Die Vorteile sind vielseitig |
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- Ihre FRET Präparate werten Sie jetzt zusammen mit den Modulen Dual Kamera, Mehrkanal und Zeitreihe und mit zwei synchronisierten Kameras doppelt so schnell online aus. Alternativ bestimmen Sie FRET Ergebnisse weiterhin offline.
- Zusätzlich definieren Sie im Offline Verfahren eigene Auswerteverfahren.
- Sie greifen auf alle Funktionen zurück, die zur Bildaufnahme und zur Bildverarbeitung in AxioVision enthalten sind. Profitieren Sie zum Beispiel von der Lowpass Funktion, um Rauschen zu unterdrücken oder verstärken Sie das Fluoreszenzsignal mit dem Gradientenfilter.
- Das Physiologie Modul unterstützt alle AxioCam Kameras. Besonders schnelle Prozesse zeichnen Sie jetzt zum Beispiel mit der Hochgeschwindigkeitskamera AxioCam HS auf.
In Kombination mit den Modulen Zeitreihe und Mehrkanalfluoreszenz können Sie Ihre FRET Proben auch online auswerten. Für besonders schnelle Vorgänge im Millisekundenbereich empfehlen wir zusätzlich das Dual Kamera Modul. Mit diesem Modul nehmen Sie Ihre Präparate synchron in zwei Kanälen auf.
Wählen Sie dafür eine der 3 Methoden nach Youvan et al (1997), Gordon et al (1998) oder Xia et al (2001). Diese 3-Kanal Methoden setzen voraus, dass Sie pro Zeitpunkt drei Bilder aufnehmen. Mit dem Dual Kamera Modul verkürzt sich die Aufnahmesequenz dann auf nur zwei Aufnahmen pro Zeitpunkt.
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| Ein geeignetes FRET Auswerteverfahren wählen Sie bequem und schnell aus einer Dropdown-Liste aus. Die Liste führt fünf bekannte und vorprogrammierte Verfahren. |
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Für FRET Experimente mit besonders empfindlichen Präparaten liefern wir Ihnen unsere neue 2-Kanal Korrekturmethode. Mit dem Dual Kamera Modul erfassen Sie zwei Fluoreszenzkanäle parallel in jeweils einem Aufnahmeschritt pro Zeitpunkt. Weiterhin ist auch die Methode nach Siegel enthalten, mit der Sie den FRET Anteil durch Akzeptorbleichen bestimmen.
Alternativ bestimmen Sie FRET Ergebnisse aber auch offline. Öffnen Sie dafür einfach ein Mehrkanal - Zeitreihenbild.
Mit den Offline Methoden werten Sie alle 2- und 3 - Kanal FRET Zeitreihenbilder mit einem von 7 bekannten Verfahren aus. Diese Verfahren bieten sich vor allem für langsame FRET Prozesse an, die Sie nacheinander erfassen. Hierfür können Sie alle Mikroskoptypen verwenden, die die Aufnahme von Fluoreszenz-Mehrkanal-Zeitreihenbildern erlauben. In diesem Fall wird die motorisierte Aufnahme zwar empfohlen, ist jedoch nicht zwingend erforderlich.
Auch hier wählen Sie eine der klassischen FRET Methoden nach Youvan et al., Gordon et al., Xia et al., sowie Donor- oder Akzeptor-Ratio. Auch die Methode nach Siegel zur FRET Bestimmung durch Akzeptorbleichen ist enthalten. Weiterhin gibt es eine Methode zur 2-Kanal FRET Bestimmung, sowie die Möglichkeit selbst Formeln zu definieren.
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| Auch für die Offline Auswertrung wählen Sie ein geeignetes FRET Verfahren bequem aus einer Dropdown-Liste aus. Die Liste enthält sieben bekannte und vorprogrammierte Verfahren und die Möglichkeit für die Definition eigener FRET Formeln. |
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| Eigene Auswerteverfahren erstellen |
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Neben den bekannten FRET Methoden definieren Sie jetzt im Offline Verfahren auch eigene Auswerteverfahren. Dazu fügen Sie einfach jede beliebige FRET Formel ein. Für die Bildkanäle und Rechenoperatoren wählen Sie entsprechende Symbole aus der vorgegebenen Tabelle aus. Auch Methoden nach dem Akzeptorbleichen über ein Referenzbild oder zur Berechnung von einfachen Ratiobildern passen Sie so Ihren Bedürfnissen einfach an.
Im Handbuch bzw. in der Onlinehilfe finden Sie viele Beispiele vorprogrammierter Methoden. Diese können Sie einfach in das Formelfeld kopieren.
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| Eigene FRET Formeln geben Sie einfach über die Tastatur in das Formelfeld ein. Dafür wählen Sie die Kanalbezeichnungen und Rechenoperatoren aus der Terms-Tabelle aus. |
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